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基因敲除細胞系構(gòu)建服務(wù)：助力精準探索與技術(shù)創(chuàng)新

隨著基因組學和分子生物學的快速發(fā)展，基因敲除技術(shù)已成為探索基因功能、研究疾病機制和開發(fā)新藥的重要工具?；蚯贸毎底鳛樵摷夹g(shù)的核心產(chǎn)品之一，廣泛應(yīng)用于學術(shù)研究、藥物篩選及疾病模型的構(gòu)建等領(lǐng)域。今天就為大家分享一下基因敲除細胞系構(gòu)建流程。

基因敲除細胞系構(gòu)建的技術(shù)流程

1.目標基因選擇與設(shè)計敲除策略并制備敲除載體

2. 轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導

3. 篩選與驗證

4. 單克隆篩選

5. 基因敲除驗證

基因敲除細胞應(yīng)用

敲除細胞作為重要的研究模型，廣泛應(yīng)用于探究基因功能、疾病機制和藥物靶點篩選。通過模擬基因缺失對細胞行為的影響，可以揭示特定基因在生物學過程中的作用以及它們在疾病發(fā)展中的關(guān)鍵性。

基因敲除（KO）細胞系正是CRISPR/Cas9介導基因編輯中最典型的應(yīng)用之一。以下是KO細胞系的主要應(yīng)用方向：

抗體特異性驗證

抗體是生命科學中使用泛的試劑之一，但目前缺少統(tǒng)一的特異性驗證標準。未驗證的抗體容易產(chǎn)生非特異性結(jié)果，影響實驗可重復(fù)性。KO細胞系可作為抗體特異性驗證的重要工具，通過與野生型細胞平行對照，為試劑質(zhì)量把關(guān)。未來，KO細胞系有望成為抗體驗證的行業(yè)標準。

確定參與通路的基因

一條信號通路通常涉及多個分子與過程?；蚯贸毎捎糜隍炞C特定基因或突變的功能。例如，JAK1基因在細胞因子信號傳導和腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。敲除JAK1后，STAT磷酸化水平可通過Western blot檢測是否發(fā)生變化，從而確定其在信號轉(zhuǎn)導過程中的作用。

確定藥物靶點

研究通路中基因功能常用藥理學干預(yù)結(jié)合基因編輯的方法。以6-硫鳥嘌呤（6-TG）為例，該藥物依賴DNA錯配修復(fù)（MMR）系統(tǒng)發(fā)揮作用。通過HPRT和目標基因的聯(lián)合敲除，可篩選6-TG的耐藥性細胞，進而驗證藥物作用機制及潛在靶點。

建立疾病模型

基因敲除（KO）細胞系是通過基因編輯技術(shù)刪除或失活特定基因，幫助研究人員深入理解基因在細胞功能、發(fā)育以及疾病中的作用。在疾病模型的建立中，KO細胞系提供了一個強大的工具，能夠模擬特定的基因缺失或突變，進而幫助研究疾病的分子機制，開發(fā)新藥，甚至測試治療方案。

開發(fā)治療工具

近年來，多個基因編輯臨床試驗相繼展開。包括基于基因敲除的CAR-T細胞、敲除BCL11A增強子提升γ球蛋白表達，用于治療鐮刀狀細胞病和β-地中海貧血。目前，已有多項臨床試驗嘗試敲除T細胞PD-1基因，應(yīng)用于前列腺癌、食管癌、腎細胞癌等治療，這些試驗被視為體外CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)在癌癥治療中概念驗證的重要突破。

雅吉生物的優(yōu)勢

雅吉生物依托強大的基因編輯平臺和豐富的技術(shù)經(jīng)驗，能夠為客戶提供從基因靶點設(shè)計、載體構(gòu)建到細胞系驗證的一站式服務(wù)。無論是基礎(chǔ)研究中的小規(guī)模定制需求，還是大規(guī)模藥物篩選中的高通量構(gòu)建，我們都能夠為客戶提供高效、精準的解決方案。